วิธีการสร้างบัฟเฟอร์ TBE ใน 3 ขั้นตอนง่ายๆ

บัฟเฟอร์ TBE เป็นสารละลายบัฟเฟอร์ที่ทำจากฐาน Tris, กรดบอริกและ EDTA (หรือ Tris-borate-EDTA) บัฟเฟอร์นี้มักจะใช้สำหรับการวิเคราะห์ผลึก DNA ของผลิตภัณฑ์ agarose gel electrophoresis ซึ่งเป็นผลมาจากการขยาย PCR โปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอหรือการทดลองการโคลนนิ่งดีเอ็นเอ

บัฟเฟอร์ TBE มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการแยกชิ้นส่วน DNA ขนาดเล็ก (MW <1000) เช่นผลิตภัณฑ์ย่อยย่อยของเอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด

TBE มีความสามารถในการเก็บบัฟเฟอร์มากขึ้นและจะให้ความละเอียดที่คมชัดกว่าบัฟเฟอร์ TAE บัฟเฟอร์ TAE เป็นสารละลายที่ประกอบด้วยฐาน Tris, กรดอะซิติกและ EDTA (Tris-acetate-EDTA)

TBE โดยทั่วไปมีราคาแพงกว่า TAE และยับยั้ง DNA ligase ซึ่งอาจทำให้เกิดปัญหาหากมีการทำขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์และ ligation ตามมา ด้วยขั้นตอนง่ายๆ 3 ขั้นตอนต่อไปนี้เรียนรู้วิธีสร้างบัฟเฟอร์ TBE ไม่ควรใช้เวลามากกว่า 30 นาทีในการสร้างบัฟเฟอร์นี้ นี่คือวิธี:

เตรียมโซลูชันสต็อกของ EDTA

ควรเตรียมสารละลาย EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) ก่อนเวลา EDTA จะไม่เข้าสู่สารละลายจน pH มีค่าประมาณ 8 0. สำหรับสารละลายที่มีปริมาตร 500 มิลลิลิตรเท่ากับ 0. 5 M EDTA ให้น้ำหนัก 93. 05 กรัม EDTA disodium salt (FW = 372. 2) แล้วละลายด้วยน้ำ deionized 400 มิลลิลิตรและปรับ pH ด้วย NaOH หลังจากนั้นให้เติมสารละลายที่ปริมาตรขั้นสุดท้าย 500 มิลลิลิตร

เตรียมสารละลาย TBE

เตรียมสารละลาย TBE เข้มข้น (5x) โดยการชั่งน้ำหนัก 54 g ฐาน Tris (FW = 121. 14) และ 27. 5 g boric acid (FW. = 61. 83) และละลายในน้ำ deionized ประมาณ 900 มิลลิลิตร จากนั้นเพิ่ม 20 มิลลิลิตรของ 0. 5 M EDTA (pH 8 0) และปรับสารละลายให้เป็นปริมาตรขั้นสุดท้าย 1 ลิตร

สารละลายนี้สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง แต่ตะกอนจะเกิดขึ้นในสารละลายที่เก่ากว่า เก็บบัฟเฟอร์ในขวดแก้วและทิ้งถ้าเกิดการตกตะกอน

เตรียมสารละลาย TBE

สำหรับ agarose gel electrophoresis สามารถใช้บัฟเฟอร์ TBE ที่ความเข้มข้น 0x (การลดสัดส่วนของสต็อคที่เข้มข้น 1: 10) เจือจางสารละลายสต็อกด้วยน้ำ deionized 10 เท่า ความเข้มข้นของตัวทำละลายขั้นสุดท้ายคือ 45 mM Tris-borate และ 1 mM EDTA ขณะนี้บัฟเฟอร์พร้อมสำหรับใช้เจล agarose แล้ว

สิ่งที่คุณต้องการ

ในการทำบัฟเฟอร์ TBE คุณจะต้องใช้สารเพียง 4 ชนิดเท่านั้น รายการที่เหลืออยู่ในรายการนี้คืออุปกรณ์ สารทั้ง 4 ชนิดนี้ ได้แก่ EDTA disodium salt, tris base, boric acid และ deionized water

สำหรับอุปกรณ์คุณจะต้องมี pH meter และมาตรฐานการสอบเทียบตามความเหมาะสม นอกจากนั้นคุณยังต้องใช้หัวเทียนและขวดขนาด 600 มิลลิลิตรและ 1500 มิลลิลิตร ปัดเศษออกความต้องการอุปกรณ์ของคุณจะจบการศึกษาถังและบาร์กวนและจาน

ตรวจสอบพื้นที่โฆษณาในห้องทดลองที่คุณจะใช้เพื่อให้แน่ใจว่าคุณมีทุกอย่างที่คุณต้องการก่อนเริ่มใช้งาน ไม่มีอะไรที่เลวร้ายยิ่งกว่าการต้องหยุดกลางคันในการเตรียมโซลูชันเนื่องจากคุณใช้วัสดุที่ไม่เหมาะสม

ถ้าห้องทดลองของคุณอยู่ที่โรงเรียนหรือที่ทำงานของคุณให้ตรวจสอบกับบุคลากรที่เหมาะสมเพื่อดูว่ามีรายการทั้งหมดในคลัง การทำเช่นนั้นอาจช่วยให้คุณประหยัดเวลาและพลังงานในที่สุด