RFLP: ความหมายและการใช้ในการแก้ไขความลับของ DNA

ข้อ จำกัด Fragment Length Polymorphism (RFLP) เป็นวิธีการวิเคราะห์ทางพันธุกรรมที่ช่วยให้บุคคลสามารถระบุได้โดยใช้รูปแบบเฉพาะของการตัดเอนไซม์ในบางพื้นที่ของดีเอ็นเอ

นอกจากนี้ยังเรียกว่า RFLP Analysis เทคนิคนี้ใช้ประโยชน์จากความหลากหลายในรหัสพันธุกรรมของแต่ละบุคคล แม้ว่าสมาชิกทุกคนของเผ่าพันธุ์จะมีองค์ประกอบทางพันธุกรรมเหมือนกัน แต่ความแตกต่างเล็กน้อยเหล่านี้จะอธิบายถึงรูปแบบของฟีโนไทป์เช่นลักษณะหรือการเผาผลาญอาหารระหว่างบุคคล

RFLP: เทคนิคการวิเคราะห์และการประยุกต์ใช้

เทคนิคการวิเคราะห์ RFLP เกี่ยวข้องกับการตัดภูมิภาคโดยเฉพาะของดีเอ็นเอที่มีความแปรปรวนที่รู้จักกันด้วยเอนไซม์ที่ จำกัด แล้วแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอโดยใช้ agarose gel electrophoresis และกำหนดจำนวน ชิ้นส่วนและขนาดสัมพัทธ์

เอนไซม์ที่ จำกัด เป็นเอนไซม์ซึ่งเป็นโมเลกุลโปรตีนที่ตัดดีเอ็นเอในสถานที่ที่ จำกัด ในสาระสำคัญตัวอย่างดีเอ็นเอถูกทำลายและย่อยด้วยเอนไซม์ที่ จำกัด เศษที่เกิดขึ้นจะถูกแยกออกตามความยาวของพวกเขาและรูปแบบของขนาดชิ้นส่วนจะแตกต่างกันไปสำหรับแต่ละการทดสอบ

ขั้นตอนการ RFLP เต็มรูปแบบต้องมีการติดฉลากการตรวจวิเคราะห์การกระจายตัวของดีเอ็นเอการอิเล็กโทรฟิเรชั่นการบวมการผสมพันธุ์การซักผ้าและการ autoradiography RFLP ที่ตรวจพบจะถูกมองเห็นโดยใช้ฟิล์มเอ็กซ์เรย์ในการ autoradiography ซึ่งสามารถตรวจดูและวิเคราะห์ชิ้นส่วนดีเอ็นเอหลังจากที่แยกออกจากกันโดยการอิเล็กโตรโฟเรซิส

แอพพลิเคชันบางส่วนสำหรับการวิเคราะห์ RFLP ประกอบด้วย:

DNA fingerprinting

• นักวิทยาศาสตร์ทางนิติวิทยาศาสตร์อาจใช้การวิเคราะห์ RFLP เพื่อระบุผู้ต้องสงสัยตามตัวอย่างหลักฐานที่รวบรวมได้ในฉากอาชญากรรม พ่อ RFLP ใช้ในการกำหนดความเป็นบิดาหรือการตรวจสอบบรรพบุรุษ
• ความหลากหลายทางพันธุกรรม เทคนิคนี้สามารถนำมาใช้ในการศึกษาวิวัฒนาการและการอพยพของสัตว์ป่าศึกษารูปแบบการผสมพันธุ์ในสัตว์และในการตรวจหาและวินิจฉัยโรคบางชนิด
• เทคนิคการใช้การตรวจหาความแปรผันของจีโนมของ RFLP เป็นเครื่องมือที่สำคัญในการทำแผนที่จีโนมและการวิเคราะห์โรคทางพันธุกรรม ถ้าตำแหน่งของยีนที่เป็นโรคเฉพาะเจาะจงกำลังถูกค้นพบในโครโมโซมบางตัวนักวิจัยจะวิเคราะห์ DNA ของสมาชิกในครอบครัวที่เป็นโรคแล้วหารูปแบบการถ่ายทอดทางพันธุกรรมที่คล้ายกันในอัลลีล RFLP เมื่อยีนของโรคถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นแล้วการวิเคราะห์ RFLP ต่อสมาชิกในครอบครัวอื่น ๆ จะสามารถเปิดเผยยีนของยีนที่กลายพันธุ์หรือแสดงถึงความเสี่ยงต่อโรคโดยรวม

เป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องทราบว่าเทคนิค RFLP ไม่ใช้กันอย่างแพร่หลายในขณะนี้ซึ่งมีเทคนิคที่ใหม่กว่าและมีประสิทธิภาพมากขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ DNA ในด้านนิติวิทยาศาสตร์และสาขาอื่น ๆ

มุมมองเชิงลบของการวิเคราะห์

น่าเสียดายที่เทคนิคการวิเคราะห์ RFLP น่าเบื่อและช้า นอกเหนือจากการต้องการตัวอย่างดีเอ็นเอจำนวนมาก - ตัวอย่างจะต้องมีขนาดประมาณหนึ่งในสี่ซึ่งมีขนาดใหญ่มากสำหรับตัวอย่างดีเอ็นเอ - กระบวนการจากการติดฉลากการสอบสวนการซักผ้าและ autoradiography อาจใช้เวลาถึง เต็มเดือนให้เสร็จสมบูรณ์

ผลลัพธ์จากโครงการจีโนมมนุษย์ได้เปลี่ยนความต้องการ RFLP มาเป็นอย่างมาก โครงการอนุญาตให้มีการกำหนดลำดับ DNA ทั้งหมดที่พบได้ในเซลล์มนุษย์จีโนมของมนุษย์และเพื่อระบุยีนทั้งหมดในจีโนมของมนุษย์