ความสำคัญของกิจกรรมเฉพาะในการแยกโปรตีน

กิจกรรมเฉพาะคือคำที่ใช้ในการวัดอัตราการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์กับสารตั้งต้น

กิจกรรมของเอนไซม์เฉพาะ (กิจกรรมเฉพาะสำหรับสั้น) เป็นตัวชี้วัดความบริสุทธิ์ของเอนไซม์และถูกอ้างถึงเป็นหน่วย / mg ค่านี้จะยิ่งใหญ่ขึ้นเนื่องจากการเตรียมเอนไซม์จะกลายเป็นน้ำเน่าเนื่องจากปริมาณโปรตีน (มก.) โดยปกติจะน้อยลง แต่อัตราการเกิดปฏิกิริยายังคงเหมือนเดิม (หรืออาจเพิ่มขึ้นเนื่องจากการลดการแทรกแซงหรือการกำจัดสารยับยั้ง)

กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจง: การวัดจลศาสตร์ของเอนไซม์

เอนไซม์เป็นโปรตีนที่ทำหน้าที่เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาในการลดปริมาณพลังงานกระตุ้นสำหรับปฏิกิริยาที่เกิดขึ้น พลังงานกระตุ้นเป็นพลังงานที่จำเป็นในการเกิดปฏิกิริยา "เริ่มต้น" เนื่องจากปฏิกิริยาจำนวนมากไม่เกิดขึ้นอย่างรวดเร็ว (หรือเกิดขึ้นได้ทั้งหมด) หากมีความเป็นไปได้ทางอุณหพลศาสตร์

เอนไซม์กระตุ้นปฏิกิริยาเฉพาะในไซต์เฉพาะ (เรียกว่าไซต์ที่ใช้งาน) ซึ่งตัวทำปฏิกิริยาจะจับและทำปฏิกิริยาเพื่อสร้างผลิตภัณฑ์ พื้นผิวมีไซต์ที่ใช้งานอยู่เฉพาะเจาะจงเท่านั้นเพื่อไม่ให้สารอื่น ๆ รวมตัวหรือทำปฏิกิริยาในไซต์เดียวกัน เช่นเดียวกับล็อคและคีย์เอนไซม์แต่ละตัวจะกระตุ้นเฉพาะปฏิกิริยาเฉพาะ (มีข้อยกเว้นบางประการ)

กิจกรรมเฉพาะที่ใช้ในวิธีการแยกโปรตีนเพื่อระบุเปอร์เซ็นต์ของการทำให้บริสุทธิ์ เป็นสิ่งสำคัญที่ต้องทราบหน่วยนี้เมื่อซื้อเอนไซม์เพื่อระบุว่าเท่าใดของเอนไซม์บริสุทธิ์ที่คุณได้รับ

เมื่อวัดจลศาสตร์ของเอนไซม์ (อัตราการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์กับพื้นผิวหรือพื้นผิว) กิจกรรมเฉพาะคือปริมาณของสารตั้งต้นที่เอนไซม์จะแปลงเป็นปฏิกิริยาต่อปฏิกิริยาต่อ mg โปรตีนในการเตรียมเอนไซม์ต่อหน่วยของเวลา

ตัวอย่างของกิจกรรมเฉพาะคือ:

กิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์ที่แยกได้ถูกวัดที่ 150 ออนซ์ / นาที / มิลลิกรัมโปรตีนก่อนการทำให้บริสุทธิ์และ 800 umoles / min / mg หลังจากการทำให้บริสุทธิ์

กิจกรรมเฉพาะคือการวัดความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ที่สำคัญ กระบวนการที่แตกต่างกันของเอนไซม์บริสุทธิ์ควรมีค่าเท่ากันและแม้แต่การเจือจางสารละลายเอนไซม์หลายครั้งก็จะมีค่ากิจกรรมที่เหมือนกันแม้ว่าจะมีค่ากิจกรรมเอนไซม์ที่แตกต่างกัน ทั้งนี้เนื่องจากในการคำนวณกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงตัวนับ (หน่วย / ml) และตัวหาร (mg / ml) จะได้รับผลกระทบอย่างเท่าเทียมกัน

กิจกรรมเฉพาะเจาะจงแตกต่างจากกิจกรรมมาก แต่การคำนวณกิจกรรมเฉพาะยังคงขึ้นอยู่กับค่ากิจกรรม ซึ่งหมายความว่าค่ากิจกรรมเฉพาะที่ระบุจะขึ้นอยู่กับข้อกำหนดของเอนไซม์

กลุ่มของเอนไซม์ที่มีค่ากิจกรรมจำเพาะต่ำกว่าที่คาดไว้อาจมีโมเลกุลของเอนไซม์ที่เปลี่ยนหรือผสมกับสิ่งสกปรก

• ปัจจัยที่มีผลต่อเอนไซม์

อาจเป็นไปได้ว่าเอนไซม์ตัวใดตัวหนึ่งอาจมีค่ากิจกรรมที่วัดได้แตกต่างกันเมื่อวัดในห้องปฏิบัติการที่แตกต่างกัน (นั่นคือความแตกต่างจริงในกิจกรรมที่วัดไม่เห็นได้ชัดจากการใช้คำจำกัดความของหน่วยอื่น)

วิธีการทดสอบจะดำเนินการ (วิธีการทดสอบเพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์ของเอนไซม์) จะมีผลต่อค่ากิจกรรมที่รายงาน ตัวอย่างเช่นเอนไซม์มักใช้งานได้ดีระหว่างอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเมื่อเทียบกับที่ 20 องศาเซลเซียสดังนั้นถ้าทำการทดสอบที่ 21 องศาเซลเซียสค่าต่างๆจะแตกต่างจากการทดสอบที่อุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียส (โดยทั่วไป , การทดสอบจะดำเนินการที่อุณหภูมิระหว่าง 20-37 องศาเซลเซียส)

ดังนั้นความหมายของเอนไซม์ยูนิทจะแสดงออกได้ดียิ่งขึ้นเมื่อ: 1 หน่วย (U) คือปริมาณของเอนไซม์ที่กระตุ้นปฏิกิริยาของสารตั้งต้น 1 nmol ต่อนาทีภายใต้สภาวะมาตรฐาน