PBS (ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ) เป็นบัฟเฟอร์ที่นิยมใช้สำหรับการย้อมสีอิมมูโนเคมีและมักใช้ในการวิจัยทางชีววิทยา ความเข้มข้นของไอออนบวกและไอออนของสารละลายจะตรงกับความต้องการของร่างกายมนุษย์ (isotonic)
PBS เป็นสารละลายเกลือน้ำที่มีโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟตโซเดียมคลอไรด์และในบางกรณีโพแทสเซียมคลอไรด์และโพแทสเซียม dihydrogen phosphate
การย้อมสี Immunofluorescent สำหรับ IHC
การย้อมสี Immunofluorescent เป็นวิธีการย้อมสี Immunofunochemical (IHC) ครั้งแรก เมื่อความสัมพันธ์ระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดีกับพื้นฐานของปฏิกิริยาแอนติเจนจะกลายเป็นสิ่งที่มองเห็นได้โดยใช้สีย้อมเรืองแสงเมื่อผสานกับแอนติบอดี กระบวนการนี้เกิดขึ้นเมื่อเปิดใช้งานโดยแสงที่น่าตื่นเต้นของความยาวคลื่นที่เฉพาะเจาะจงภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง Immunohistochemistry หมายถึงกระบวนการตรวจหาแอนติเจน (เช่นโปรตีน) ในเซลล์ของเนื้อเยื่อโดยใช้หลักการของแอนติบอดีที่มีผลผูกพันเฉพาะกับแอนติเจนในเนื้อเยื่อชีวภาพ
การใช้เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS)น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์มีการใช้กันมากเนื่องจากมีความเป็นพิษและไม่เป็นพิษต่อเซลล์ส่วนใหญ่ สามารถใช้เพื่อเจือจางสารและใช้ล้างภาชนะบรรจุที่มีเซลล์ พีบีเอสสามารถใช้เป็นตัวเจือจางในวิธีการอบแห้งของสารชีวโมเลกุลเพราะโมเลกุลของน้ำภายในจะมีโครงสร้างอยู่รอบ ๆ สาร (โปรตีนตัวอย่างเช่น) เพื่อให้ 'แห้ง' และตรึงไว้กับพื้นผิวที่แข็งตัว
ฟิล์มบาง ๆ ที่เชื่อมโยงกับสารจะป้องกันไม่ให้เกิดการสึกหรอหรือการเปลี่ยนแปลงรูปแบบอื่น ๆ บัฟเฟอร์คาร์บอเนตอาจใช้เพื่อวัตถุประสงค์เดียวกัน แต่มีประสิทธิผลน้อยลง นอกจากนี้ PBS ยังสามารถใช้สเปกตรัมอ้างอิงในการวัดการดูดซับโปรตีนใน ellipsometry
การเตรียม PBSมีหลายวิธีในการเตรียม PBS
บางสูตรไม่ประกอบด้วยโพแทสเซียมขณะที่อาหารอื่น ๆ มีแคลเซียมหรือแมกนีเซียม สูตรบัฟเฟอร์ด้านล่างซึ่งค่อนข้างง่ายคือ 10X PBS stock solution (0. 1M) นอกจากนี้ยังมีตัวเลือกในการเพิ่ม Tween กระบวนการทั้งหมดใช้เวลาประมาณ 10 นาที
วิธีการทำบัตเตอร์ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS)
ชั่งน้ำหนักต่อไปนี้: 10.9g ปราศจากโซเดียมฟอสเฟต dibasic (Na2HPO4), 3, 2g ซัลเฟตโซเดียมฟอสเฟตเดี่ยว (NaH2PO4) และโซเดียมคลอไรด์ 90 กรัม (NaCl)
ละลายทั้งหมดที่กล่าวมาในน้ำกลั่นที่มีระดับต่ำกว่า 1 ลิตร
- ปรับ pH เป็น 7 4.
- ทำให้โซลูชันมีปริมาตรขั้นสุดท้าย 1 ลิตร
- (optional) สำหรับสารละลายที่มี 0. 5% Tween 20 ให้เพิ่ม 5mL Tween 20 ลงในสารละลาย 1 ลิตร
- เจือจาง 10X ก่อนใช้และปรับค่า pH หากจำเป็น
- เคล็ดลับในการทำ PBS Buffer
- เก็บที่อุณหภูมิห้อง
น้ำยาไม่ระเหยอาจถูกทดแทน แต่คุณจะต้องคำนวณมวลที่เหมาะสมเพื่อรองรับโมเลกุลของน้ำเพิ่ม
- โซเดียมฟอสเฟต dibasic (ไม่มีน้ำ)
- โซเดียมคลอไรด์
เครื่องชั่งและชั่งน้ำหนักเรือ
- เครื่องกวนแม่เหล็กและเครื่องกวนบาร์
- สิ่งที่คุณต้องการทำบัฟเฟอร์พีบีเอส
- โซเดียมฟอสเฟตแบบเดียว (ไม่มีน้ำ)
- > หัววัดค่า pH, ปรับเทียบและเหมาะสมสำหรับปรับ pH
- ขวดปริมาตร 1 ลิตร
- Tween 20 (อุปกรณ์เสริม)