ทั้งหมดเกี่ยวกับข้อ จำกัด เอนไซม์

คุณรู้เกี่ยวกับเอนไซม์ที่ จำกัด มากแค่ไหน? ทำความเข้าใจเกี่ยวกับสิ่งที่พวกเขาทำและเหตุผลที่สำคัญยิ่งขึ้นด้วยการตรวจสอบนี้

การ จำกัด เอนไซม์ข้อ จำกัด

endonucleases ข้อ จำกัด เป็นคลาสของเอนไซม์ที่ตัดโมเลกุลดีเอ็นเอ เอนไซม์แต่ละตัวรู้จักลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ซ้ำกันในแถบดีเอ็นเอ ลำดับดังกล่าวมักจะยาวประมาณ 4-6 คู่เบส ลำดับเป็น palindromic ในที่สาย DNA ฟรีมีลำดับเดียวกันในทิศทางย้อนกลับ

กล่าวอีกนัยหนึ่งทั้งสองสายของดีเอ็นเอถูกตัดไปที่ตำแหน่งเดียวกัน

เอนไซม์เหล่านี้มีอยู่

เอนไซม์ที่ถูก จำกัด อยู่ในหลายสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียซึ่งบทบาททางชีววิทยาของพวกเขาคือการมีส่วนร่วมในการป้องกันเซลล์ เอนไซม์เหล่านี้ "จำกัด " ดีเอ็นเอจากต่างประเทศ (เช่นไวรัส) ที่เข้าสู่เซลล์โดยการทำลายมัน เซลล์เจ้าบ้านมีระบบการปรับเปลี่ยนข้อ จำกัด ในการยับยั้ง DNA ของตัวเองในสถานที่ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับเอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด ตามลำดับเพื่อป้องกันไม่ให้เกิดการแตกแยก กว่า 800 เอนไซม์ที่รู้จักกันได้รับการค้นพบที่รู้จักมากกว่า 100 ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่แตกต่างกัน

การใช้เทคโนโลยีชีวภาพ

การใช้เอนไซม์ในการลดความสามารถในการตัดดีเอ็นเอเป็นเส้นใยเล็กเพื่อศึกษาความแตกต่างของความยาวชิ้นส่วนของแต่ละบุคคล (Restriction Fragment Length Polymophism - RFLP) พวกเขายังใช้สำหรับโคลนยีน

เทคนิค RFLP ถูกใช้เพื่อระบุว่าบุคคลหรือกลุ่มบุคคลมีความแตกต่างในลำดับยีนและรูปแบบการตัดทอนของข้อ จำกัด ในบางพื้นที่ของจีโนม

ความรู้เกี่ยวกับพื้นที่ที่ไม่ซ้ำกันเหล่านี้เป็นพื้นฐานสำหรับการตรวจลายพิมพ์ดีเอ็นเอ วิธีการเหล่านี้ขึ้นอยู่กับการใช้ agarose gel electrophoresis ในการแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอ บัฟเฟอร์ TBE ซึ่งประกอบด้วยฐาน Tris, boric acid และ EDTA มักถูกใช้เพื่อตรวจหาผลิตภัณฑ์ดีเอ็นเอของ agarose gel electrophoresis

ประเภทของเอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด

เอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด 3 ประเภทคือ Type I จะลดดีเอ็นเอในตำแหน่งที่สุ่มได้ถึง 1000 คู่หรือมากกว่าจากสถานที่ที่ได้รับการยอมรับ ประเภทที่สามลดประมาณ 25 คู่ - ฐานจากเว็บไซต์ ประเภท I และ III ต้องมี ATP และอาจเป็นเอนไซม์ขนาดใหญ่ที่มีหลายยูนิตย่อย เอนไซม์ Type II ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านเทคโนโลยีชีวภาพตัดดีเอ็นเอภายในลำดับที่รู้จักโดยไม่ต้องใช้ ATP และมีขนาดเล็กและง่ายกว่า

เอนไซม์ข้อ จำกัด Type II มีชื่อตามชนิดแบคทีเรียที่แยกได้ ตัวอย่างเช่นเอนไซม์ EcoRI ถูกแยกออกจาก

E coli ประชาชนส่วนใหญ่คุ้นเคยกับ E coli การระบาดของโรคในอาหาร เอนไซม์การยับยั้ง Type II สามารถสร้างบาดแผลได้สองแบบขึ้นอยู่กับว่าพวกเขาตัดเส้นทั้งสองข้างตรงกลางของลำดับการรับรู้หรือแต่ละเส้นใยใกล้กับส่วนท้ายของลำดับการรับรู้

การตัดเดิมจะสร้าง "ปลายทื่อ" ที่ไม่มีการเหวี่ยงนิวคลีโอไทด์ หลังสร้าง "เหนียว" หรือ "เหนียว" สิ้นสุดลงเนื่องจากแต่ละชิ้นส่วนที่เป็นผลของ DNA มีส่วนที่ยื่นออกมาซึ่งชมเชยชิ้นส่วนอื่น ๆ ทั้งสองมีประโยชน์ในด้านพันธุศาสตร์ระดับโมเลกุลสำหรับการสร้างดีเอ็นเอและโปรตีนรีคอมบิแนนท์

รูปแบบของดีเอ็นเอนี้มีความโดดเด่นเนื่องจากมีการผลิตโดยการผูก (เชื่อมกัน) ของสองเส้นขึ้นไป